转基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b定量检测法

转基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b仅用于食品和饲料中转基因DAS-44406-6大豆的鉴定和定量方法的校准或质量控制。干的CRM粉具有吸湿性。

转基因DAS-44406-6大豆ERM-BF436b是五种DAS-44406-6大豆粉末认证参考物质(CRMs)之一，含有不同质量分数的转基因大豆。ERM-BF436b是由陶氏农业科学公司(DAS，Oxon，UK)提供的转基因DAS-44406-6大豆的全种子生产而成。

荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆:

目的：建立实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。

方法：针对转基因DAS- 44406-6大豆品系，进行5’-RACE，测定该品系转基因大豆外源片段与大豆染色体重组的边界序列，并根据该边界 序列设计引物和探针。使用23 种非DAS-44406-6品系转基因植物作为阴性对照测试实时荧光PCR引物和探针的特异 性，以DAS-44406-6品系样品制备6 个含量梯度的样品进行检测低限实验。使用数字PCR技术进行定量检测，并确 定定量检测的低限。

结果：建立的转基因DAS-44406-6大豆品系的实时荧光PCR特异性检测方法品系鉴定特异性较 强，实时荧光PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为100 ng/反应时，为0.01%的转基因大豆含量，约为16.6 个 拷贝的DAS-44406-6基因组DNA；数字PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为0.5 ng/反应、转基因大豆含量为 1%时，相对标准偏差为0.7%。因此，建立的转基因DAS-44406-6大豆品系实时荧光PCR和数字PCR特异性检测方法 符合转基因检测的要求。

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